
C'est à New York que Samuel L. Jackson fit la rencontre de Spike Lee, qui lui confiera plus tard quelques petits rôles dans ses films (Do the right thing, Mo' Better Blues). Après des apparitions dans Un Prince à New York et Les Affranchis, c'est cette collaboration qui lui permit d'obtenir au Festival de Cannes 1991 le Prix du Meilleur second rôle pour Jungle Fever, dans lequel il incarne un junkie. Mais ce fut son rôle de Jules, le tueur philosophe du Pulp Fiction de Quentin Tarantino (1994), qui le propulse au rang de star. Tarantino le dirigera à nouveau dans Jackie Brown, en 1998, et lui offrira également un petit rôle dans Kill Bill : Volume 2, en 2004.
Particulièrement prolifique dans les années 90, Samuel L. Jackson se distingua notamment par ses rôles de policier, comme dans Kiss of Death (Barbet Schroeder, 1994) ou Négociateur (F. Gary Gray, 1998). En 2000, il incarna le célèbre flic noir Shaft. Très à l'aise dans les films grand public, il joua ainsi dans Jurassic Park et eut pour partenaire Bruce Willis dans Die Hard 3 : Une Journée en Enfer (1995), acteur avec qui il collaborera à nouveau dans Incassable (M. Night Shyamalan, 2000). Ce dernier film démontre que l'acteur, fer de lance d'un cinéma dit commercial, sait aussi se tourner vers des projets plus ambitieux, comme lorsqu'il incarne un père vengeur dans Le Droit de tuer ? .
Figure hollywoodienne incontournable, Samuel L. Jackson fut choisi par George Lucas pour incarner le maître Jedi Mace Windu dans les trois premiers volets de la saga Star Wars, en 1999 (Episode I : La Menace fantôme), 2002 (Episode II : L'Attaque des clones) et 2005 (Episode III : La Revanche des Sith). On lui doit d'ailleurs une couleur supplémentaire de lame de sabre-laser: en effet, il insista lors du tournage de l'Attaque des Clones pour créer un sabre à lame violette, n'arrivant pas à choisir entre le bleu et le vert, couleurs traditionnelles pour l'arme qu'il manierait durant le tournage, ce qu'il attendait avec une impatience presque enfantine.
Toujours aussi actif dans les années 2000, il apparut notamment aux génériques d'XXX et sa suite, de S.W.A.T. unité d'élite, de Basic, de Coach Carter, de Black Snake Moan et du très fun Des Serpents dans l'Avion, où il confirme son aptitude à ne pas se prendre au sérieux. En 2008, l'acteur s'illustre dans les thrillers fantastiques : Chambre 1408 et Jumper, ainsi que dans le film de super héros : Iron Man, aux côtés de Robert Downey Jr.